domingo, 10 de mayo de 2009

tarea 2, tercer parcial

CBTIS NO. 155


OPERAR EQUIPO Y MATERIALES DE LABORATORIO


DR. VICTOR MANUEL ALFARO LOPEZ


2LV(M)


TAREA 2, 3 PARCIAL, MEDIOS DE CULTIVO


GRANADOS JAIME LUZ MARIA


MEDIOS DE CULTIVO

Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio.

El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el medio de cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el cultivo.

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grados de humedad y presión de oxigeno adecuado, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad.

El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparación de medios de cultivo. Se licua completamente ala temperatura del agua hirviendo y se solidifica al enfriarse a 40 grados. Con mínimas excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en el.

Clasificación de los medios de cultivo basándose en su composición química.

Medios sinteticos o químicamente definidos. Llevan fuente de carbono, fuente d enitrogeno, sales que suplan iones (P, K, Mg, Fe, Ca, ) otros elementos como son estimuladores del crecimiento ( eritritol para Brucella abortus) pero siempre a concentraciones conocidas.

Medios complejos o de composición idenfinida. Estos medios llevan ingredientes como extracto de levadura, peptona, infusión de cerebro, extracto de carne, etc. Que contiene nutrientes en abundancia pero sin saber con exactitud la composición cualitativa ni cuantitativa de estos nutrientes.

Medios de enriquecimiento. Son medios complejos (normalmente) con adictivos adicionales para favorecer el crecimiento de determinados organismos (particularmente heterótrofos exigentes).

Medios selectivos. Son aquellos que favorecen por su diseño el crecimiento específico de un microorganismo particular (o grupo de microorganismos). Es de gran utilidad para el aislamiento de microorganismos a partir de una población microbiana mixta.

Medios diferenciales. Son aquellos destinados a facilitar la discriminación de microorganismos de una mezcla por sus propiedades diferenciales de crecimiento en dicho medio.

Medios de mantenimiento. Suelen ser distintos a los de crecimiento optimo ya que el crecimiento rápido y prolífico suele ocasionar la muerte rápida de las células.


SIEMBRA

Sembrar o inocular es introducir artificialmente una porción de muestra (inóculo) en un medio adecuado, con el fin de iniciar un cultivo microbiano. Luego de sembrado, el medio de cultivo se incuba a una temperatura adecuada para el crecimiento.
La siembra puede realizarse en medio líquido, sólido o semisólido, utilizando punta, ansa, hisopo o pipeta estéril.

Cultivo en medio líquido

Habitualmente se realiza en tubos o en matraces. El crecimiento se puede manifestar por enturbiamiento, por formación de velo o película, o por sedimento.

Cultivo en medio sólido

Puede ser en tubos o placas.

a) Tubos con agar inclinado. Para sembrarlos, se mueve el ansa o la punta suavemente sobre la superficie del agar con un movimiento en zigzag desde el fondo hasta la parte superior, cuidando de no dañar el agar.

b) Tubos sin inclinar. Se siembran introduciendo una punta en el centro del agar. También se llama siembra por picadura.

c) Siembra en placas. Puede ser en superficie o incorporada.

En superficie

  • 1) Se colocan 0.1 mL de la dilución de la muestra con pipeta estéril en el centro de la placa, y se distribuye con un rastrillo estéril.
    2) Se siembra con un ansa para aislar, como se explica más adelante.
    3) Se siembra con un hisopo.

Incorporada

  • Se coloca 1 mL de la muestra en una placa estéril vacía, en el centro de la misma. Sobre ella se agregan 20 mL de medio de cultivo fundido y termostatizado a 45ºC; luego se agita la placa, moviéndola 4 veces en sentido horario, 4 en sentido antihorario, una vez de arriba a abajo, una vez hacia los costados y una vez en sentido antihorario.

Las placas se incuban invertidas, ya que la alta concentración de agua en el medio puede provocar condensación durante la incubación y si cae sobre la superficie del agar, se extiende dando un crecimiento confluente.

En medio sólido cada célula viable dará origen a una colonia y por lo tanto la siembra en placas se puede utilizar, no solo para cultivar microorganismos, sino además para contar y aislar.

En general cuando se quieren tener colonias aisladas a partir de un material determinado, es necesario diluir la muestra en tubos con suero fisiológico estéril.

AISLAMIENTO

Aislar: Es separar un tipo de microorganismo a partir de un población que los contiene de varios tipos. En habitats naturales, raramente encontramos a los microorganismos en cultivo puro (un solo tipo de microorganismo), por lo tanto es necesario hacer algún procedimiento de aislamiento para separar e identificar los distintos tipos de m.o. presentes.

El aislamiento se puede lograr directamente a partir de una muestra cuando el o los m.o. están en una proporción adecuada.

Cuando el m.o. que se desea aislar e identificar se encuentra en baja proporción en la muestra, o interesa un solo tipo de m.o., se lleva a cabo un procedimiento llamado búsqueda que involucra una primera etapa de aumento del número de microorganismos del tipo que se desea aislar en relación al resto de la población. Luego se aisla por el método de estrías o por dilución y se identifica.

Para aislar se utiliza alguno de los siguientes procedimientos:

a) aislamiento por estrías
b) aislamiento por dilución

Aislamiento en placa por estrías

Existen distintas técnicas, el objeto es obtener colonias aisladas.

Técnica a.

Consiste en cargar el ansa con la muestra y hacer estrías paralelas en la cuarta parte de la superficie de la placa; se quema el ansa, se enfría, se gira la placa 90º y se vuelve a estriar tocando 3 o 4 veces el área sembrada inicialmente y cubriendo otro cuarto de placa. Por último, sin quemar el ansa, se estría el resto de la superficie sin sembrar.

Técnica b

Con el ansa cargada se hacen 3 o 4 estrías; se quema el ansa, se hacen 3 o 4 estrías perpendiculares a las anteriores, se quema el ansa y se repite el procedimiento hasta agotar la superficie de la placa.




Aislamiento por dilución en medio sólido

Se emplean tanto el método de siembra incorporada como el de siembra en superficie. Suele ser necesario diluir la muestra. Para ello se puede preparar las diluciones decimales en condiciones asépticas usando suero fisiológico o algún otro diluyente.

La siembra incorporada se realiza tal como se describió anteriormente. También se pueden preparar las diluciones directamente en tubos de agar fundido y termostatizado (20 mL) se agita por rotación entre las manos y se vierte en placas de Petri estériles.

AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS ANAEROBIOS

Para aislar microorganismos anaerobios que son rápidamente destruidos por exposición al oxígeno, las placas pueden ser preparadas en la forma usual, y luego de sembradas, incubadas en recipientes cerrados en atmósfera sin oxígeno.

También se puede sembrar diluciones en tubos con agar fundido y termostatizado que luego se tapan con una capa de vaselina-parafina, para evitar el acceso de aire.

Con anaerobios más sensibles al oxígeno, se trabaja en cámaras anaerobicas, o también usando la técnica del "roll-tube", que es un tubo en el que el agar se deposita en las paredes al hacerlo girar mientras se enfría; se trabaja gaseando el tubo continuamente con gas libre de O2 mientras el tubo está destapado.

tarea 1 del 3 parcial




CBTIS NO. 155


OPERAR EQUIPO Y MATERIALES DE LABORATORIO


DR. VICTOR MANUEL ALFARO LOPEZ


2LV(M)


TAREA 1, 3 PARCIAL, BACTERIAS


GRANADOS JAIME LUZ MARIA


Paramecium Los paramecios (género Paramecium) son protozoos ciliados con forma de suela de zapato o elipsoide, habituales en aguas dulces estancadas con abundante materia orgánica, como charcos y estanques.

Carecen de flagelos, pero los cilios son muy abundantes y recubren toda su superficie. A ellos les corresponde proporcionar movimiento al organismo. La membrana externa absorbe y expulsa regularmente el agua del exterior con el fin de controlar la osmorregulación, proceso dirigido por dos vacuolas contráctiles.

En su anatomía destaca el citostoma, una especie de invaginación situada a todo lo largo del paramecio de la que éste se sirve para capturar el alimento, conformado por partículas orgánicas flotantes y microorganismos menores. El citostoma conduce a una citofaringe antes de que el alimento pase al interior de este protozoo. Otros orgánulos de fácil observación son el núcleoeucariota, situado junto a un "micronúcleo" en el centro del paramecio, y las vacuolas digestivas, que digieren constantemente el alimento capturado. Los desechos se expulsan por exocitosis, mediante vacuolas de secreción que se originan a partir de las digestivas.


Salmonella

Salmonella es un género de bacteria que p
ertenece a la familia Enterobacteriaceae, formado por bacilos gramnegativos, anaerobios facultativos, con flagelos perítricos y que no desarrollan cápsula ni esporas. Son bacterias móviles que producen sulfuro de hidrógeno (H2S). Fermentan glucosa por poseer una enzima especializada, pero no lactosa, y no producen ureasa.
Es un agente zoonótico de distribución universal. Se transmite por contacto directo o contaminación cruzada durante la manipulación, en el procesado de alimentos o en el hogar,
también por vía sexual.
Algunas salmonellas son comunes en la piel de tortugas y de muchos reptiles, lo cual puede ser importante cuando se manipulan a la vez este tipo de mascotas y alimentos.
















Escherichia coli

Escherichia coli (E. coli) es quizás el organismo procarionte más estudiado por el ser humano, se trata de una bacteria que se encuentra generalmente en los intestinos animales y por ende en las aguas negras. Fue descrita por primera vez en 1885 por Theodore von Escherich, bacteriólogo alemán, quién la denominó Bacterium coli. Posteriormente la taxonomía le adjudicó el nombre de Escherichia coli, en honor a su descubridor. Ésta y otras bacterias son necesarias para el funcionamiento correcto del proceso digestivo. Además produce vitaminas B y K. Es un bacilo que reacciona negativamente a la tinción de Gram (gramnegativo), es anaeróbico facultativo, móvil por flagelos peritricos (que rodean su cuerpo), no forma esporas, es capaz de fermentar la glucosa y la lactosa y su prueba de IMVIC es ++--.

Es una bacteria utilizada frecuentemente en experimentos de genética y biotecnología molecular.

Proteus

Proteus es un genero de bacterias gramnegativas, que incluye patógenos responsables de

muchas infecciones del tracto urinario. Las especies de Proteus normalmente no fermentan

lactosa por razón de tener una β galactosidasa, pero algunas se han mostrado capaces de

hacerlo en el test TSI (Triple Sugar Iron). Son oxidasa-negativas y ureasa-positivas.

Algunas especies son mótiles. Tienden a ser organismos pleomórficos, no esporulados ni capsulados y son productoras de fenilalanina desaminasa. Con la excepción de P. mirabilis, todos los Proteus reaccionan negativos con la prueba del indol.

Proteus es un género de bacterias ubicuos, residentes del tracto intestinal del hombre y otros animales.

Crecen en medios corrientes y moderadamente selectivos a temperatura corporal de 37ºC. Crecen formando capas diseminadas por virtud de su gran motilidad.

Hay tres especies que causan infecciones oportunistas en el hombre: P. vulgaris, P. mirabilis, y P. penneri. Causan infecciones urinarias, enteritis, abscesos hepáticos, meningitis, otitis media y neumonía con o sin empiema, entre otros. Es un frecuente invasor secundario de quemaduras y heridas, así como infecciones nosocomiales.

Todas las especies de Proteus son resistentes a la ampicilina.

Brucella

Brucella es un género de bacterias Gram negativas. Son cocobacilos pequeños (0,5-0,7 por 0.6-1.5 µm), no-móviles y encapsulados. Se conocen unas pocas especies de Brucella, cada una de las cuales se diferencia ligeramente en la especificidad del huésped: B. melitensis infecta cabras y ovejas, B. abortus infecta vacas, B. suis infecta cerdos, B. ovis infecta ovejas y B. neotomae. Recientemente se ha descubierto una nueva especie en mamíferos marinos: B. pinnipediae.

Brucella es la causa de la brucelosis. Es transmitida por la

ingestión de comida infectada, contacto directo con un animal infectado o por inhalación de aerosoles. La brucelosis se produce principalmente por exposición ocupacional y por el consumo de productos lácteos no pasteurizados.

La brucelosis humana no se considera una enfermedad contagiosa y las personas solo se infectan por contacto con los fluidos animales. La brucelosis también se considera una enfermedad laboral puesto que tiene una alta incidencia entre los trabajadores que trabajan con animales.

La brucelosis a menudo se adquiere en el laboratorio. La infección se suele producir cuando no se sospecha de la enfermedad y las muestras son manipuladas por el personal del laboratorio antes de que cultivo resulte positivo.

Brucella se aisla de cultivos sobre un medio de sangre. Mediante la tinción de Gram aparecen como densas aglomeraciones de cocobacilos Gram-negativos.

Brucella podría también detectarse en la médula ósea.

No hay un procedimiento clínico para el tratamiento óptimo, pero la combinación más utilizada implica tres semanas de tratamiento con rifampicina y doxiciclina dos veces al día, que parece ser eficaz.


jueves, 7 de mayo de 2009

Practica 3 moleculas inorganicas


CBTIS NO. 155


OPERAR EQUIPO Y MATERIALES DE LABORATORIO


DR. VICTOR MANUEL ALFARO LOPEZ

2LV(M)


PRACTICA NO.3 MOLECULAS INORGANICAS


GRANADOS JAIME LUZ MARIA



Objetivo


Poner en práctica los conocimientos adquiridos teóricamente sobre el microscopio y la forma de enfocar una preparación. Realizar una observación por medio de un microscopio de un trozo de cebolla.



Introducción


Todos los cuerpos están formados por células, la célula es la unidad básica de la vida. Hay una gran variedad de células pueden ser grandes, chicas, largas, anchas, redondas, cilíndricas, etc..



Es necesario el equipo de bioseguridad para realizar todo tipo de practicas.

El microscopio es capas de aumentar una imagen de 4 a 500 veces

Se coloca una capa de cebolla delgada en un porta objetos y se cubre con un cubre objetos, se sostiene el porta objetos con las pisas metálicas, y se centra la capa de la cebolla. Se manipula el tornillo macrometrico y micrométrico para enfocar la cebolla y debe ser enfocado con el objetivo 10x y después con el objetivo 40x.


conclusion
aunque a simple vista no se vea aveces las celulas conforman nuestro cuerpo, se debe saber manejar correctamente el microscopio por q si no es asi se puede danar el microscopio. Esta practica fue inprecionante dado que se observaron celulas.(un gran avace)

practica 2 unidades de pesos y medidas

CBTIS NO. 155


OPERAR EQUIPO Y MATERIALES DE LABORATORIO


DR. VICTOR MANUEL ALFARO LOPEZ


2LV(M)


PRACTICA NO.2 UNIDADES DE PESOS Y MEDIDAS


GRANADOS JAIME LUZ MARIA



Objetivo

Aprender a utilizar los materiales de laboratorio en la clasificación de cristalería empleando las unidades de medidas.


Introducción

En la antigüedad no se tenían medidas exactas hasta la elaboración del sistema métrico decimal después de la revolución francesa. Después del sistema métrico decimal se elaboro el sistema internacional de unidades para unificar todas las medidas y que fueran iguales en todo el mundo.


Para realizar prácticas en el laboratorio se debe contar con el equipo de bioseguridad obligatoriamente.

Con el material de cristalería q se encontraba sobre la meza y con una balanza se elaboro la practica.

Se pesaron todos los materiales de cristalería con mucho cuidado.



Matraz de erlenmeyer 200ml -----------133.3gr.

Probeta ---------------------------------98.2gr.

Vaso de precipitado-----------------------27gr.

Vidrio de reloj-----------------------------19gr.

Caja de petri de vidrio-------------------83.4gr

Placa de vidrio excavada-------------.-.-50.4gr.

Cristalizador---------------------------- 53.5gr.

Cristalizador con harina------------------93.2gr.

Espátula---------------------------------- 53gr.

Tubo de ensayo--------------------------7.7gr.

Gradilla de plástico----------------------165gr.

Pipeta graduada de 1in 1/100ml--------- 2.9gr.

Pipeta graduada de 10ml----------------15.1gr.

Pipeta graduada de 10ml----------------22.2gr.

Pipeta Pasteur---------------------------2.9gr.

Cubeta----------------------------------1.3gr.

Una caja petri solo tiene una capacidad de 19ml. Se necesitan un litro de agua para rehidratar 58gr de reactivo para la elaboración de un medio de cultivo. ¿Qué cantidad de reactivo para un medio de cultivo se necesita para 7 cajas petri?

Datos:

19ml---1 caja petri

58gr---1 litro

58gr--1000ml

Xgr--19ml(7)

X = (7)(19gr)(58gr)/100


(7)(19gr)(58gr) = 7,714


7,714 /1,000 = 7.714


X =7.714gr.


Conclusión

Las medidas en la vida diaria y cotidiana son muy importantes al igual que la presicion .

Tanto en el área de salud que será donde los alumnos de laboratorio clínico apliquen los conocimientos que adquirieron.

Practica 1 microscopio enfoque

CBTIS NO. 155


OPERAR EQUIPO Y MATERIALES DE LABORATORIO


DR. VICTOR MANUEL ALFARO LOPEZ


2LV(M)


PRACTICA NO,1 MICROSCOPIO, ENFOQUE


GRANADOS JAIME LUZ MARIA




Objetivo

El alumno aprendera a usar y manejar adecuadamente el microscopio (enfoque)


Introducción

En el planeta hay estructuras muy pequeñas las cuales no son observadas por el ojo humano sin ayuda de algún instrumento, un ejemplo de instrumento de ayuda para la observación de las estructuras pequeñas es el microscopio.


Desarrollo

Para realizar cualquier tipo de practica es necesario q el alumno traiga puesto su equipo de bioseguridad mientras se encuentre dentro del laboratorio.(bata blanca, guantes, cubre bocas, gorro)

Primero se retiraron con mucho cuidado el porta objeto y cubre objetos que se encontraban en el microscopio, abriendo las pinzas y agarrando cada uno por separado de los lados, colocándolos en una caja negra donde se encontraba la cámara de neubauer y otros materiales.

Después con mucho cuidado se agarro la cámara de neubaur de los lados y se coloco en el microscopio sobre la platina abriendo las pinzas metálicas y cerrándolas para q se sostuviera. Se coloco sobre la placa de vidrio, en la cuel se pueden alojar un numero conocido de liquido, otra placa de vidrio plana.

Después se centra el objetivo (la cámara de neubauer ). Se acerca lo mas q se puede el revolver a la cámara de neubauer y se va retirando con el tornillo micrométrico.

Hasta ver la cuadricula formada en el centro de la cámara de neubauer.




Conclusión

Todo se torna como un juego entre tu vista y la manipulación del microscopio con cuidado y responsabilidad moviendo la platina, manipulando los tornillos (macrometrico y micrométrico) el regular la luz y mover la palanquita del iris.

Aun que es un poco complicado por que mueves muchas cosas pero en si es un poco divertido.





Cámara de neubauer

La Cámara de Neubauer es un instrumento utilizado en cultivo celular para realizar conteo de células en un medio de cultivo líquido. Consta de dos placas de vidrio, entre las cuales se puede alojar un volumen conocido de líquido. Una de las placas posee una grilla de dimensiones conocidas y que es visible al microscopio óptico.

Para contar las células de un cultivo líquido, se agrega una gota de este entre estas dos placas y observar al microscopio óptico la cantidad de células presentes en un campo determinado de la grilla.

Con base en la cantidad de células contadas, conociendo el volumen de líquido que admite el campo de la grilla, se calcula la concentración de células por unidad de volumen de la solución de medio de cultivo inicial.



Microscopio



Obtención de un buen enfoque


Colocar el porta objetos sobre la platina del microscopio.


Utilizar el objetivo de menor aumento


Deslizar el tubo del microscopio por medio del tornillo macrometrico, observando lateralmente

hasta que el objetivo quede cerca del porta objetos.


Observar através de los oculares subiendo lentamente el tubo del microscopio hasta observar la preparación enfocada.


Afinar la imagen moviendo lentamente el tornillo micrometrico.



Cuidado del microscopio


Para el traslado se toma con la mano derecha el brazo del microscopio y con la mano izquierda la base.


Debe evitarse todo movimiento brusco.


Evitar su manejo con las manos húmedas o mojadas.


El sistema óptico y de iluminación no deben ser tocados con la mano.


No colocar porta objetos mojados sobre la platina.


Las preparaciones en fresco deberán cubrirse con cubreobjetos.


Después de usarse el lente de inmersión debe ser limpiado.


El microscopio se enciende hasta que empiece la observación y no se apaga constantemente.