Se realiza en un portaobjetos un frotis con material de las cajas petri se toma con el asa bacteriológica previamente esterilizada en la flama del mechero una gota de aguadel vaso de precipitados se introduce ala caja petri y se toma una pequeña muestras del productoque se desarrollo en ella, se deposita en el portaobjetos dando movimientos de izquierda a derecha del cristal para realizar el barrido el cual debe quedar delgado y fino, si queda grueso se vuelve a esterilizar el asa de platino se toma una gota de agua se vuelve a realizar el barrido hasta lograr que quede fino y así sucesivamente hasta lograrlo.
Una ves revisado el frotis se va a fijar a fuego directo pasando el porta objetos por el mechero son dejarlo fijamente sobre el.
Ya fijado el frotis queda listo para el proceso de tinción.
Materiales para frotis:
Porta objetos
Asa bacteriológica
Baso de precipitado de 50ml con 25 ml de agua destilada
El alumno debe realizar la observación macroscopica en el medio de cultivo sembrado.
Materiales:
5-7 cajas petri con medio de cultivo
Herramienta de medicion: pie de rey /bernier
Registrar la observación, medicion y conteo de las colonias bacterianas, esto se debe berificar en un campo de esterilización que se realiza con los 2 mecheros, donde verificaremos el olor, color y dimenciond e la colonia.
PRACTICA 3, 3 PARCIAL, SIEMBRA EN MEDIO DE CULTIVO
GRANADOS JAIME LUZ MARIA
Indicaciones
El alumno debe realizar una siembra de medio de cultivo de forma estriada, variada y aplicar el nombre de cada una de ellas de las que anteriormente se dieron en el salón de clases.
Materiales:
6-7 cajas petri de medios de cultivo anteriormente habilitadas o elaboradas.
Asa bacteriológica
Vasos de precipitados con 25 ml de agua destilada
2 mecheros de bunsen
Papel blanco para la meza
Masking tape color café
3-4 Torundas de algodón
2 torundas de algodón con alcohol
Muestras para siembra
Saliva
Muestra interdental
Orina
Agua preparada de la calle
Verdura de las que utilizan para preparar tortas
Muestra de sangre
Tubo cónico de plástico
Técnica de extracción sanguínea
Para esta técnica se utilizan los siguientes materiales:
Jeringa de 5 ml para extraer 2.5ml
Torundas de algodón con alcohol
Torniquete
Se realiza asepsia y antisepsia del piegle del brazo utilizando una torunda de algodón con alcohol
Los movimientos de limpieza son de arriba hacia abajo del brazo al antebrazonuncaregresarlo por que contaminamos el área.
Una vez echa la asepsia y antisepsia iniciamos la técnica de venopunción y para ello debemos manejar nuestra jeringa poder usar desechable.
Se verifica el aseguramiento de la aguja de la jeringa dándole un pequeño giro y nuevamente apretando y posteriormente jalando el embolo hacia atrás de la misma y que a su ves lo regresamos al fondo de la jeringaquedando esta lista para su uso.
Una ves lista nuestra jeringay ya limpia la zona de pliegue se aplica el torniquete en parte media del brazo para hacer presión y obtener una vaso dilatación del conducto sanguíneo, en el cual se introducirá la aguja de la jeringa que es punzo cortante y ya estando dentro del vaso sanguíneo extraemos la sangre en cantidad de un volumende 2.5 ml la que depositaremos en el tubo con tapón rojo sin anticoagulante.
No se retira el tapón de el tubo y una vez tomado el tiempo desde su extracción hasta el llenado del tubo registraremos el tiempo de coagulación que es de 1-5minutos hasta 8 minutos el tiempo real esta entre 1-2minutos.
Una vez coagulada la sangre en el tubo de ensaye, retiraremos el tapón y centrifugamos a 1500 revoluciones por minutos durante 5 minutos teniendo como resultado la precipitación del paquete sanguíneo por centrifugación al que le daremos el nombre de separación de paquete y plasma.
Una ves separado el paquete en el tubo de ensaye vacío trasvasamos el plasma sanguíneo el cual es de color amarillo pálido o amarillo paja y se utilizara para realizar la siembra.
Nota: esta técnica se utilizara nuevamente en la practica numero 8 que seria aglutinación
Se sembrara el liquido plasmatico en medio de cultivo utilizando la tecnica con barita de cristal denominada siembra por dispersión.
Desarrollo
Fase pre analítica
Entramos al laboratorio nos colocamos el equipo de bioseguridad completo
El profesor entrego a cada meza distintas cajas de medio de cultivo las cuales eran distintas
Nos dio el profesor una caja de agarde hierro de Kligler, una caja de agar destrosa saubouraud, 2 cajas agar salmonela y síguela y 2 cajas de agar Mac Conkey.
En cada una de las diferentes cajas se iba sembrar cosas diferentes
Primero se hizo la extracción de sangre a navarro Llanes Javier y se deposito la sangre en el tubo de tapón rojo.
Se hizo un raspado de pie a gracia luna Viridiana después se tomo una muestra interdental de la misma persona.
Luego se tomo una muestra interdental a Edgar Eduardo Vásquez
Y también se tomo una muestra de lechuga de una torta de la cafetería.
Fase analítica
La muestra de raspado de pie se sembró en el agar dextrosa sabouraud con el método tradicional de las cuatro estrías. Que es tomando una muestra pequeña con el asa bacteriológica ya esterilizada de el portaobjetos con el cual se realizo el raspado y se hacen cuatro zig-zags.
Con el isótopo con el que se tomo la muestra interdental de Viridiana gracia luna se realizo la siembra en el agar de Mac Conkey con el método de aislamiento por estrías.
Con la muestra interdental de Edgar Eduardo Vázquez se realizo el mismo procedimiento en el mismo agar.
La sangre de Javier Navarro Llanes se dejo coagular y después se centrífugo a 1500 revoluciones por minuto durante 5 minutos.
Después el plasma sanguíneo se vacío a un tubo vacío y de ahí se tomo una muestra con el asa y se sembró en 2 medios de cultivo de agar salmonela y síguela utilizando el método de Kass en el cual se pasa el asa por en medio de la caja de extremo a extremo y se forma una especie de M en zig-zag.
Con la muestra de lechuga se realizo el método de tapete o cuadriculado en el agar de Hierro de Mac Conkey.
Al finalizar todas las siembras se taparon y se entregaron al profesor.
EL alumno debe realizar el proceso de esterilización del producto que ocupara en la práctica de siembras. Para ello requiere tener los conocimientos de la técnica de esterilización en autoclave ya anteriormente dada.
Investigar técnica de esterilización (resumen)
Las autoclaves funcionan permitiendo la entrada o generación de vapor de agua pero restringiendo su salida, hasta obtener una presión interna de 103 kPa, lo cual provoca que el vapor alcance una temperatura de 121 grados centígrados. Un tiempo típico de esterilización a esta temperatura y presión es de 15-20 minutos.
El proceso completo de esterilización en un autoclave se compone de diferentes fases:
Fase de purgado: A medida que la resistencia calienta el agua del fondo del calderón, se va produciendo vapor que desplaza el aire, haciéndolo salir por la válvula de purgado que está abierta. Esta fase termina cuando se alcanza la temperatura de esterilización.
Fase de esterilización: Una vez cerrada la válvula de purgado y alcanzada la temperatura de esterilización previamente seleccionada se inicia el proceso de esterilización.
Fase de descarga: Terminado el proceso de esterilización, deja de funcionar la resistencia calefactora, con lo que deja de producirse vapor y la presión y temperatura del calderón empieza a bajar poco a poco.
Materiales:
Autoclave
Agua destilada
Corriente electrica
Guantes para alta temperatura
Desarrollo
Primero se debe conectar el auto clave y color agua destilada en su interior
Después se introduce el medio de cultivo q se esterilizara tamponeado con tape y algodon
A medida que se va calentando el agua, el aire sale por la valbula de purgado la cual esta abierta
Después se cierra la válvula y cuando alcanza la temperatura de 121 centrigados comienzael proceso de esterilización
Después de 20 minutos la presion y temperatura va bajando
Se tiene mucho cuidado por que el vapor caliente sale por la valbula y puede causar quemaduras graves
Después de que se bajo al temperatura y precion se sacan los matrases de erlenmeyer de el autoclave de mesa.
Nota: Bitacora de trabajoa: el alumno debe realizar su propia vitacora de actividades en la cual regustarra nombre de las practicas, tiempos utilizados, fecha de la elaboración de trabajo, observaciones en esta bitacora debe existiral final del recuadroun recuadro que indique el espacio para firmar de aseptado o rechazado; esta debe ser cuadriculada utilizando la creatividad del alumno.
Para realizar un medio de cultivose debe solisitar en el laboratorio de analisis clinicos un formato para anotar los materiales que se utilizaran en la elaboración de un medio de cultivo.
El alumno debe de tener su equipo de bioseguridad completo.
Bestir la meza de laboratorio con papel blanco.
Una persona o dos del grupo deben verificar que la linea de gas np este activada para ello se deben conectar los mecheros y abrir las válvulas que se encuentran por debajo de las mezas.
Y acomodarlas en un formato como bitacora de actividades la cual inicia con este medio de cultivo y termina con la observación microscopica de este.
Una vez repozado el emdio de cultivo se expone al fuego del mechero con un ligero muñequeo hasta dejar que se presente la ebullición cuidando que este producto al hervir no se derrame ya que puede ocacionar quemaduras hasta de 2do grado.
Nota: Si el medio de cultivo se tira por negligencia tendra cada uno d elso integrantes 2 puntos menos en su calificación.
Una vez que ya se dio la ebullición y el tiempo adecuado de 1 minuto se deja enfriar y reposar para poderlo tapar (tamponear) con torundas de algodón muy cuidadosamente sin que estas se vallan al interios del baso, se cubren con maskin tape para asegurarse que esten bien cerrados se etiquetan con el numero de la meza, el nombre del medio de cultivo y la fecha ya terminado este proceso se introduce al auto clave para iniciar la esterilización del medio.
Tecnica de esterilizacion
Ya esterilizado el medio de cultivo se retira del auto clave se deja enfriar poniéndolo en el campo de esterilización de la meza el cual esta a base de 2 mecheros.
Se deja enfriar, se preparan los materiales para vaciado, vaso de precipitados de 50 ml y las cajas petri
Se toma el baso de prelimitado se esteriliza previamente la boquilla se pasa breve mente por el mechero una vez que este listo se le vierte el liquido del medio de cultivo que se depositara en cada caja petri.
Ya estando en las cajas petri trasvasadas se dejan semi tapadas y no en su totalidad para evitar que se forme vapor de agua en su interior.
Se tapan las cajas petri una vez que el alumno verifique que el piso del medio de cultivo sea solidificado ya serradas se estiban o enciman se etiquetan con los datos del medio de cultivo numero de mesa y fecha de elaboración y se entregaran al encargado del laboratorio en forma invertida para su refrigeración.
Si el producto elaborado se contamina en un promedio de 24-72 horas quiere decir que no se tomaron las medidas adecuadas de esterilización por lo que se debe realizar un nuevo medio de cultivo lógico aplicando la sanción requerida en el laboratorio.
Libro en el que se lleva la cuenta y razón de los sucesos que tuvieron lugar durante un periodo determinado.
El mantenimiento correctivo o mantenimiento por rotura.
Este mantenimiento agrupa las acciones a realizar ante un funcionamiento incorrecto, deficiente o incompleto que por su naturaleza no pueden planificarse en el tiempo.
Mantenimiento preventivo
Es una actividad programada de inspecciones, tanto de funcionamiento como de seguridad, ajustes, reparaciones, análisis, limpieza, lubricación, calibración, que deben llevarse a cabo en forma periódica en base a un plan establecido. El propósito es prever averías o desperfectos en su estado inicial y corregirlas para mantener la instalación en completa operación a los niveles y eficiencia óptimos.
Frotis
Se denomina frotis a la extensión que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o cultivo con objeto de separar lo más posible los microorganismos, ya que si aparecen agrupados en la preparación es muy difícil obtener una imagen clara y nítida.
Etapa pre-analitica
Preparación del paciente
Tratamiento y procedimientos previos
Hora de toma de muestra
Recolección de la muestra
Preparación de suero, plasma orina y otros.
Almacenamiento Transporte
Etapa analítica
Elección adecuada de metodología
Reactivos, Kits, instrumentos de calidad
Profesional capacitado
Control interno
Control externo
Sueros certificados
Tiempo optimo de proceso
Manual del procedimiento
Rapidez en las técnicas que lo requieren
Etapa post analítica
Análisis de resultados
Confirmación de resultados
Valores Biológicos de referencia
Tiempo oportuno de informe
Transcripción de resultados
Personal administrativo capacitado
Control de calidad en relación a la clínica
Comunicación constante para verificar la interpretación correcta del resultado.
Las paredes celulares de ciertos parásitos y bacterias contienen ácidos grasos (ácidos micólicos) de cadena larga (50 a 90 átomos de carbono) que les confieren la propiedad de resistir la decoloracíón con alcohol-ácido, después de la tinción con colorantes básicos. Por esto se denominan ácido-alcohol resistentes. Las micobacterias como M. tuberculosis y M. marinum y los parásitos coccídeos como Cryptosporidium se caracterizan por sus propiedades de ácido-alcohol resistencia. La coloración clásica de Ziehl-Neelsen requiere calentamiento para que el colorante atraviese la pared bacteriana que contiene ceras.
Se ha desarrollado una coloración de ácido-alcohol resistencia modificada que diferencia las especies de Nocardia (bacterias ramificadas filamentosas cuyas paredes celulares contienen ácidos-grasos de unos 50 átomos de carbono), de los actinomiceos (muy semejantes pero no ácido-alcohol resistentes). Nocardia spp son decoloradas por la mezcla ácido-alcohol estándar pero no por un tratamiento más suave con ácido sulfúrico 0,5 a 1%. Estos microorganismos se denominan ácido-alcohol resistentes parciales o débiles.
El frotis se tiñe durante unos 5 min con Carbolfucsina aplicando calor suave. Lavar con agua. Decolorar con alcohol etílico 95% con un 3% de ClH concentrado. Lavar y teñir durante 30-60 seg con Azul de Metileno (color de contraste). Lavar y secar
Tincion directa
En una tinción directa el colorante interacciona directamente con el sustrato.
Tincion indirecta
En una tinción indirecta se hace interaccionar en primer lugar a una sustancia química denominada "mordiente" con el sustrato la cual permite la posterior interacción del colorante. Usualmente los mordientes son sales, hidróxidos o alumbres de metales bivalentes o trivalentes.
Tinción de Gram o coloración Gram
Es un tipo de tinción diferencial empleado en microbiología para la visualización de bacterias, sobre todo en muestras clínicas. Debe su nombre al bacteriólogo danés Christian Gram, que desarrolló la técnica en 1884. Se utiliza tanto para poder referirse a la morfología celular bacteriana como para poder realizar una primera aproximación a la diferenciación bacteriana, considerándose Bacteria Gram positiva a las bacterias que se visualizan de color violeta y Bacteria Gram negativa a las que se visualizan de color rosa.
Tincion azul metileno Para determinados fines pueden ser utilies las tinciones con azul de metileno de Loeffler
Se utilizan para observar morfologia, agrupacion, elementos celulares ,leucocitos, celulas epiteliales,etc
