viernes, 19 de junio de 2009

Practica 8, Aglutinacion en suero sanguineo

CBTIS NO. 155


OPERAR EQUIPO Y MATERIALES DE LABORATORIO


DR. VICTOR MANUEL ALFARO LOPEZ


2LV(M)


PRACTICA 8, 3 PARCIAL, PRUEBA DE AGLUTINCAION EN SUERO SANGUINEO


GRANADOS JAIME LUZ MARIA


Indicaciones

El alumno de laboratorio clínico aprenderá a realizar una prueba de aglutinación en suero utilizando sangre fresca materiales de apoyo centrifuga, tubo con tapón rojo y técnica de venopunción esto le dará como resultado la elaboración de fase analítica de un examen de laboratorio que en la etapa post analítica tiene que reportar los resultados obtenidos

Material:

Laminilla de cristal para reacciones febriles

Palillo de madera

Centrifuga

Torundas de algodón secas

Jeringa hipodérmica de 5ml.

Torniquete

Tubo de ensaye con tapón rojo

Pipeta Pasteur con bulbo

Reactivo febri clin

Microscopio

Desarrollo

Técnica de venopunción para extracción de sangre fresca en volumen de 2.5 ml en tubo de ensaye con tapón rojo.

Una vez ya obtenida la sangre desde el inicio de su extracción hasta su coagulación al que le damos tiempo de coagulación tarda de 1-2 minutos hasta 5 minutos y en ocasiones puede llegar a 8 minutos debemos registrar el tiempo .

Estando ya la sangre coagulada retiramos el tapón del tubo e introducimos ala centrifuga para obtener la separación del paquete sanguíneo y el plasma se debe centrifugar a 1500 revoluciones por 5 minutos.

Una vez que se tenga la separación del paquete sanguíneo y el plasma este último se trasvasara a un tubo de ensaye vació.

Ya teniendo el liquido plasmático, con una pipeta Pasteur y su bulbo realizamos el punteo en la laminilla de cristal en forma ordenada etiquetándola con los serotipos o, H, A,B, brucela abortus, proteus ox19. posteriormente a este punteo agregamos una gota de reactivo Ferri clin y con pedacitos de el palillo de madera mezclamos ambos elementos ose reactivo y plasma dejando reposar 2 minutos para posteriormente realizar movimientos de rotación y traslación para poder obtener una prueba de aglutinación la cual lograremos observar macroscópicamente en forma granular o como si fuera arenilla existente en cada uno de los cerotipos ya marcados si no existe lo anterior mente mencionado se observara totalmente homogénea

Para darnos una idea de la observación microscópica la debemos verificar al microscopio donde se observara un gran numero de puntos separados y juntos indicándonos el proceso de aglutinación esto lo observamos en 10x.

Todo lo contario al proceso de aglutinación en homogéneo ósea no existe Nunkun punteo en el campo microscópico para poder reportar el resultado obtenido se requiere de la forma que el laboratorio tiene con los datos paciente datos del laboratorio fecha y hora y los cero tipos agrupados en el documento tifico O tifico H tifito A tifico B brucella abortus y proteur Ox19 en esta forma debemos aplicar con letras la palabra positivo o negativo de cada uno de los serotipos.


Practica 7, observacion microscopica

CBTIS NO. 155


OPERAR EQUIPO Y MATERIALES DE LABORATORIO


DR. VICTOR MANUEL ALFARO LOPEZ


2LV(M)


PRACTICA 7, 3 PARCIAL, OBSERVACION MICROSCOPICA


GRANADOS JAIME LUZ MARIA


Indicaciones

La laminilla ya preparada y lista se monta en la platina el microscopio se asegura con als pizas d ela platina y se observa a 100x donde encontraremos bacterias en forma esferica y bacterias en forma de baston y que ambas las podemos encontrar de 1 hasta 4 piezas en separado o conjuntas , en cadenas, en agrupaciones de tercer plano.

Materiales:

  • Portaobjeto debidamente teñido para observar el amterial bacteriológico
  • Aceite de inmercion
  • Microscopio compuesto o potonico
  • Corriente electrica

Nota:No se acepta un solo trabajo dentro del laboratorio si el borrador no lleva graficos a color.

Practica 6 , Tincion de Gram

CBTIS NO. 155


OPERAR EQUIPO Y MATERIALES DE LABORATORIO


DR. VICTOR MANUEL ALFARO LOPEZ


2LV(M)


PRACTICA 6, 3 PARCIAL, TINCION DE GRAM


GRANADOS JAIME LUZ MARIA



Indicaciones

Se realiza el proceso de tincion de gram en el porta objetos anteriormente provistos con material bacteriológico ya fijado al que le damos el nombre de frotis se utiliza la tecnica de gram la cual esta provista con 2 tinturas una degradante y un yodo dugol/lugol previamente utilizando los tiempos que marca la tecnicade gram y para ello debemos investigar esta tecnica.

Al termino de esta tincion que dura de 3-5min debemos verificar que no se queme con las tinturas , que no sea altamente degradada para que podas observarla adecuadamente si todo esto sucediera debemos realizar nuevamente las actividades y a premura de tiempo solo nos da tiempo para 2 nuevas acciones, si en la tercera oportunidad se realiza punto malo pierdes un punto de la calificación.

Si la laminilla queda debidamente teñida sele aplica una gota de aceite d einmercion para su observación.

Desarrollo

Fase analitica

Entramos al laboratorio nos colocamos el equipo de bioseguridad (bata blanca, guantes de latex, gorro, cubre bocas)

El Profesor entrego los frotis elaborados en la practica anterior.

El frotis se supergio en cristal violeta durantes 1 minuto

Después se introdujo en el yodo lugol durante 1 minuto

Luego se enjuago con alcohol – acetona

Después se enjuego con agua

Después se supergio en safranina por 1 minuto

Se enjuago con agua.

Al termina este proceso se dejo secar a ambiente.

Practica 5, Elaboracion de un Frotis

CBTIS NO. 155


OPERAR EQUIPO Y MATERIALES DE LABORATORIO


DR. VICTOR MANUEL ALFARO LOPEZ


2LV(M)


PRACTICA 5, 3 PARCIAL, ELABORACION DE UN FROTIS


GRANADOS JAIME LUZ MARIA


Indicaciones

Se realiza en un portaobjetos un frotis con material de las cajas petri se toma con el asa bacteriológica previamente esterilizada en la flama del mechero una gota de agua del vaso de precipitados se introduce ala caja petri y se toma una pequeña muestras del producto que se desarrollo en ella, se deposita en el portaobjetos dando movimientos de izquierda a derecha del cristal para realizar el barrido el cual debe quedar delgado y fino, si queda grueso se vuelve a esterilizar el asa de platino se toma una gota de agua se vuelve a realizar el barrido hasta lograr que quede fino y así sucesivamente hasta lograrlo.

Una ves revisado el frotis se va a fijar a fuego directo pasando el porta objetos por el mechero son dejarlo fijamente sobre el.

Ya fijado el frotis queda listo para el proceso de tinción.

Materiales para frotis:

  • Porta objetos
  • Asa bacteriológica
  • Baso de precipitado de 50ml con 25 ml de agua destilada
  • 2 mecheros de bunsen
  • Gas
  • Papel secante
  • Torundas del algodón
  • Torundas de algodón con alcohol



Practica 4, observacion macroscopica

CBTIS NO. 155


OPERAR EQUIPO Y MATERIALES DE LABORATORIO


DR. VICTOR MANUEL ALFARO LOPEZ


2LV(M)


PRACTICA 4, 3 PARCIAL, OBSERVACION MACROSCOPICA


GRANADOS JAIME LUZ MARIA


Indicaciones

El alumno debe realizar la observación macroscopica en el medio de cultivo sembrado.

Materiales:

  • 5-7 cajas petri con medio de cultivo
  • Herramienta de medicion: pie de rey /bernier

Registrar la observación, medicion y conteo de las colonias bacterianas, esto se debe berificar en un campo de esterilización que se realiza con los 2 mecheros, donde verificaremos el olor, color y dimenciond e la colonia.

Practica 3 Siembras en medio de cultivo

CBTIS NO. 155


OPERAR EQUIPO Y MATERIALES DE LABORATORIO


DR. VICTOR MANUEL ALFARO LOPEZ


2LV(M)


PRACTICA 3, 3 PARCIAL, SIEMBRA EN MEDIO DE CULTIVO


GRANADOS JAIME LUZ MARIA


Indicaciones

El alumno debe realizar una siembra de medio de cultivo de forma estriada, variada y aplicar el nombre de cada una de ellas de las que anteriormente se dieron en el salón de clases.

Materiales:

6-7 cajas petri de medios de cultivo anteriormente habilitadas o elaboradas.

Asa bacteriológica

Vasos de precipitados con 25 ml de agua destilada

2 mecheros de bunsen

Papel blanco para la meza

Masking tape color café

3-4 Torundas de algodón

2 torundas de algodón con alcohol

Muestras para siembra

  • Saliva
  • Muestra interdental
  • Orina
  • Agua preparada de la calle
  • Verdura de las que utilizan para preparar tortas
  • Muestra de sangre

Tubo cónico de plástico

Técnica de extracción sanguínea

Para esta técnica se utilizan los siguientes materiales:

  • Jeringa de 5 ml para extraer 2.5ml
  • Torundas de algodón con alcohol
  • Torniquete

Se realiza asepsia y antisepsia del piegle del brazo utilizando una torunda de algodón con alcohol

Los movimientos de limpieza son de arriba hacia abajo del brazo al antebrazo nunca regresarlo por que contaminamos el área.

Una vez echa la asepsia y antisepsia iniciamos la técnica de venopunción y para ello debemos manejar nuestra jeringa poder usar desechable.

Se verifica el aseguramiento de la aguja de la jeringa dándole un pequeño giro y nuevamente apretando y posteriormente jalando el embolo hacia atrás de la misma y que a su ves lo regresamos al fondo de la jeringa quedando esta lista para su uso.

Una ves lista nuestra jeringa y ya limpia la zona de pliegue se aplica el torniquete en parte media del brazo para hacer presión y obtener una vaso dilatación del conducto sanguíneo, en el cual se introducirá la aguja de la jeringa que es punzo cortante y ya estando dentro del vaso sanguíneo extraemos la sangre en cantidad de un volumen de 2.5 ml la que depositaremos en el tubo con tapón rojo sin anticoagulante.

No se retira el tapón de el tubo y una vez tomado el tiempo desde su extracción hasta el llenado del tubo registraremos el tiempo de coagulación que es de 1-5minutos hasta 8 minutos el tiempo real esta entre 1-2minutos.

Una vez coagulada la sangre en el tubo de ensaye, retiraremos el tapón y centrifugamos a 1500 revoluciones por minutos durante 5 minutos teniendo como resultado la precipitación del paquete sanguíneo por centrifugación al que le daremos el nombre de separación de paquete y plasma.

Una ves separado el paquete en el tubo de ensaye vacío trasvasamos el plasma sanguíneo el cual es de color amarillo pálido o amarillo paja y se utilizara para realizar la siembra.

Nota: esta técnica se utilizara nuevamente en la practica numero 8 que seria aglutinación

Se sembrara el liquido plasmatico en medio de cultivo utilizando la tecnica con barita de cristal denominada siembra por dispersión.


Desarrollo

Fase pre analítica

Entramos al laboratorio nos colocamos el equipo de bioseguridad completo

El profesor entrego a cada meza distintas cajas de medio de cultivo las cuales eran distintas

Nos dio el profesor una caja de agar de hierro de Kligler, una caja de agar destrosa saubouraud, 2 cajas agar salmonela y síguela y 2 cajas de agar Mac Conkey.

En cada una de las diferentes cajas se iba sembrar cosas diferentes

Primero se hizo la extracción de sangre a navarro Llanes Javier y se deposito la sangre en el tubo de tapón rojo.

Se hizo un raspado de pie a gracia luna Viridiana después se tomo una muestra interdental de la misma persona.

Luego se tomo una muestra interdental a Edgar Eduardo Vásquez

Y también se tomo una muestra de lechuga de una torta de la cafetería.


Fase analítica

La muestra de raspado de pie se sembró en el agar dextrosa sabouraud con el método tradicional de las cuatro estrías. Que es tomando una muestra pequeña con el asa bacteriológica ya esterilizada de el portaobjetos con el cual se realizo el raspado y se hacen cuatro zig-zags.

Con el isótopo con el que se tomo la muestra interdental de Viridiana gracia luna se realizo la siembra en el agar de Mac Conkey con el método de aislamiento por estrías.

Con la muestra interdental de Edgar Eduardo Vázquez se realizo el mismo procedimiento en el mismo agar.

La sangre de Javier Navarro Llanes se dejo coagular y después se centrífugo a 1500 revoluciones por minuto durante 5 minutos.

Después el plasma sanguíneo se vacío a un tubo vacío y de ahí se tomo una muestra con el asa y se sembró en 2 medios de cultivo de agar salmonela y síguela utilizando el método de Kass en el cual se pasa el asa por en medio de la caja de extremo a extremo y se forma una especie de M en zig-zag.

Con la muestra de lechuga se realizo el método de tapete o cuadriculado en el agar de Hierro de Mac Conkey.

Al finalizar todas las siembras se taparon y se entregaron al profesor.


Practica 2, Esterilizacion

CBTIS NO. 155


OPERAR EQUIPO Y MATERIALES DE LABORATORIO


DR. VICTOR MANUEL ALFARO LOPEZ


2LV(M)


PRACTICA 2, 3 PARCIAL, ESTERILIZACION


GRANADOS JAIME LUZ MARIA



Indicaciones

EL alumno debe realizar el proceso de esterilización del producto que ocupara en la práctica de siembras. Para ello requiere tener los conocimientos de la técnica de esterilización en autoclave ya anteriormente dada.

Investigar técnica de esterilización (resumen)

Las autoclaves funcionan permitiendo la entrada o generación de vapor de agua pero restringiendo su salida, hasta obtener una presión interna de 103 kPa, lo cual provoca que el vapor alcance una temperatura de 121 grados centígrados. Un tiempo típico de esterilización a esta temperatura y presión es de 15-20 minutos.

El proceso completo de esterilización en un autoclave se compone de diferentes fases:

Fase de purgado: A medida que la resistencia calienta el agua del fondo del calderón, se va produciendo vapor que desplaza el aire, haciéndolo salir por la válvula de purgado que está abierta. Esta fase termina cuando se alcanza la temperatura de esterilización.

Fase de esterilización: Una vez cerrada la válvula de purgado y alcanzada la temperatura de esterilización previamente seleccionada se inicia el proceso de esterilización.

Fase de descarga: Terminado el proceso de esterilización, deja de funcionar la resistencia calefactora, con lo que deja de producirse vapor y la presión y temperatura del calderón empieza a bajar poco a poco.


Materiales:

Autoclave

Agua destilada

Corriente electrica

Guantes para alta temperatura


Desarrollo

Primero se debe conectar el auto clave y color agua destilada en su interior

Después se introduce el medio de cultivo q se esterilizara tamponeado con tape y algodon

A medida que se va calentando el agua, el aire sale por la valbula de purgado la cual esta abierta

Después se cierra la válvula y cuando alcanza la temperatura de 121 centrigados comienza el proceso de esterilización

Después de 20 minutos la presion y temperatura va bajando

Se tiene mucho cuidado por que el vapor caliente sale por la valbula y puede causar quemaduras graves

Después de que se bajo al temperatura y precion se sacan los matrases de erlenmeyer de el autoclave de mesa.


Nota: Bitacora de trabajoa: el alumno debe realizar su propia vitacora de actividades en la cual regustarra nombre de las practicas, tiempos utilizados, fecha de la elaboración de trabajo, observaciones en esta bitacora debe existir al final del recuadro un recuadro que indique el espacio para firmar de aseptado o rechazado; esta debe ser cuadriculada utilizando la creatividad del alumno.

practica 1, Medio de cultivo

CBTIS NO. 155


OPERAR EQUIPO Y MATERIALES DE LABORATORIO


DR. VICTOR MANUEL ALFARO LOPEZ


2LV(M)


PRACTICA 1, 3 PARCIAL, MEDIO DE CULTIVO


GRANADOS JAIME LUZ MARIA


Indicaciones

Para realizar un medio de cultivo se debe solisitar en el laboratorio de analisis clinicos un formato para anotar los materiales que se utilizaran en la elaboración de un medio de cultivo.

El alumno debe de tener su equipo de bioseguridad completo.

Bestir la meza de laboratorio con papel blanco.

Una persona o dos del grupo deben verificar que la linea de gas np este activada para ello se deben conectar los mecheros y abrir las válvulas que se encuentran por debajo de las mezas.

Y acomodarlas en un formato como bitacora de actividades la cual inicia con este medio de cultivo y termina con la observación microscopica de este.

Una vez repozado el emdio de cultivo se expone al fuego del mechero con un ligero muñequeo hasta dejar que se presente la ebullición cuidando que este producto al hervir no se derrame ya que puede ocacionar quemaduras hasta de 2do grado.

Nota: Si el medio de cultivo se tira por negligencia tendra cada uno d elso integrantes 2 puntos menos en su calificación.

Una vez que ya se dio la ebullición y el tiempo adecuado de 1 minuto se deja enfriar y reposar para poderlo tapar (tamponear) con torundas de algodón muy cuidadosamente sin que estas se vallan al interios del baso, se cubren con maskin tape para asegurarse que esten bien cerrados se etiquetan con el numero de la meza, el nombre del medio de cultivo y la fecha ya terminado este proceso se introduce al auto clave para iniciar la esterilización del medio.

Tecnica de esterilizacion

Ya esterilizado el medio de cultivo se retira del auto clave se deja enfriar poniéndolo en el campo de esterilización de la meza el cual esta a base de 2 mecheros.

Se deja enfriar, se preparan los materiales para vaciado, vaso de precipitados de 50 ml y las cajas petri

Se toma el baso de prelimitado se esteriliza previamente la boquilla se pasa breve mente por el mechero una vez que este listo se le vierte el liquido del medio de cultivo que se depositara en cada caja petri.

Ya estando en las cajas petri trasvasadas se dejan semi tapadas y no en su totalidad para evitar que se forme vapor de agua en su interior.

Se tapan las cajas petri una vez que el alumno verifique que el piso del medio de cultivo sea solidificado ya serradas se estiban o enciman se etiquetan con los datos del medio de cultivo numero de mesa y fecha de elaboración y se entregaran al encargado del laboratorio en forma invertida para su refrigeración.

Si el producto elaborado se contamina en un promedio de 24-72 horas quiere decir que no se tomaron las medidas adecuadas de esterilización por lo que se debe realizar un nuevo medio de cultivo lógico aplicando la sanción requerida en el laboratorio.

Tarea 4, tercer parcial

CBTIS NO. 155


OPERAR EQUIPO Y MATERIALES DE LABORATORIO


DR. VICTOR MANUEL ALFARO LOPEZ


2LV(M)


TAREA 4, 3 PARCIAL, CONCEPTOS


GRANADOS JAIME LUZ MARIA



Bitacora

Libro en el que se lleva la cuenta y razón de los sucesos que tuvieron lugar durante un periodo determinado.

El mantenimiento correctivo o mantenimiento por rotura.

Este mantenimiento agrupa las acciones a realizar ante un funcionamiento incorrecto, deficiente o incompleto que por su naturaleza no pueden planificarse en el tiempo.

Mantenimiento preventivo

Es una actividad programada de inspecciones, tanto de funcionamiento como de seguridad, ajustes, reparaciones, análisis, limpieza, lubricación, calibración, que deben llevarse a cabo en forma periódica en base a un plan establecido. El propósito es prever averías o desperfectos en su estado inicial y corregirlas para mantener la instalación en completa operación a los niveles y eficiencia óptimos.

Frotis

Se denomina frotis a la extensión que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o cultivo con objeto de separar lo más posible los microorganismos, ya que si aparecen agrupados en la preparación es muy difícil obtener una imagen clara y nítida.

Etapa pre-analitica

Preparación del paciente

Tratamiento y procedimientos previos

Hora de toma de muestra

Recolección de la muestra

Preparación de suero, plasma orina y otros.

Almacenamiento Transporte

Etapa analítica

Elección adecuada de metodología

Reactivos, Kits, instrumentos de calidad

Profesional capacitado

Control interno

Control externo

Sueros certificados

Tiempo optimo de proceso

Manual del procedimiento

Rapidez en las técnicas que lo requieren

Etapa post analítica

Análisis de resultados

Confirmación de resultados

Valores Biológicos de referencia

Tiempo oportuno de informe

Transcripción de resultados

Personal administrativo capacitado

Control de calidad en relación a la clínica

Comunicación constante para verificar la interpretación correcta del resultado.